Herstellung von Acrylamid-Lösung zum Gießen von Gelen
Standardrezeptur für die Herstellung von Gelen für die SDS-PAGE
(modifiziert nach Laemmli2))
Lösung aus Acrylamid und N, N'-Methylenbisycrylamid
Kat.-Nr. | Zusammensetzung Acrylamide:Bis |
% C | % T | Anwendungen |
10679 | 19:1 | 5,0 | 40 | DNA-Sequenzierung |
10680 | 29:1 | 3,3 | 40 | IEF, SDS-PAGE |
10681 | 37,5:1 | 2,6 | 40 | SDS-PAGE |
10687 | 29:1 | 3,3 | 30 | IEF, SDS-PAGE |
10688 | 37,5:1 | 2,6 | 30 | SDS-PAGE |
Lagerung: 2-8 °C
SERVA Acrylamid/Bis-Lösungen sind für alle PAGE-Techniken geeignet.
Die Acrylamid/Bis-Lösung 29:1 (Kat.-Nr. 10679) eignet sich auch für die Herstellung von Gelen nach Schägger und Jagow (Anal. Biochem., (1987): 166, 368-379 2).
Die Menge an Gellösung (20 ml) ist ausreichend für 2 Vertikalminigele (100 mm x 80 mm x 1,4 mm).
Produkt |
Endgültige Gelkonzentration (% T)
|
Sammelgel
|
||||||||
7 % |
10 % |
12,5 % |
15 % |
5 % |
||||||
30 %* |
40 %* |
30 % |
40 % |
30 % |
40 % |
30 % |
40 % |
30 % |
40 % |
|
Acrylamid-Bis
|
2,33 ml |
1,75 ml |
3,33 ml |
2,50 ml |
4,17 ml |
3,13 ml |
5,00 ml |
3,75 ml |
1,67 ml |
1,25 ml |
Trenngel-
|
2,50 ml |
2,50 ml |
2,50 ml |
2,50 ml |
2,50 ml |
2,50 ml |
2,50 ml |
2,50 ml |
— |
— |
Sammelgel-
|
— |
— |
— |
— |
— |
— |
— |
— |
2,50 ml |
2,50 ml |
dest. H2O |
5,07 ml |
5,65 ml |
4,03 ml |
4,90 ml |
3,29 ml |
4,27 ml |
2,46 ml |
3,65 ml |
5,79 ml |
6,15 ml |
SDS, 10 % Lsg.
|
0,1 ml |
0,1 ml |
0,1 ml |
0,1 ml |
0,1 ml |
0,1 ml |
0,1 ml |
0,1 ml |
0,1 ml |
0,1 ml |
TEMED
|
0,015 ml |
0,015 ml |
0,015 ml |
0,015 ml |
0,015 ml |
0,015 ml |
0,015 ml |
0,015 ml |
0,015 ml |
0,015 ml |
APS, 10 % Lsg.
|
0,03 ml |
0,03 ml |
0,03 ml |
0,03 ml |
0,03 ml |
0,03 ml |
0,03 ml |
0,03 ml |
0,03 ml |
0,03 ml |
*Die Zusammensetzung der Acrylamid/Bis-Lösung (Anteile Acrylamid:Crosslinker) richtet sich nach der Anwendung. Für Standard-SDS-PAGE empfehlen wir die Acrylamid/Bis-Lösung 29:1 (Kat.-Nr. 10680) oder 37,5:1 (Kat.-Nr. 10681).
Benötigte Puffer
Trenngel-Puffer, 4x (1,5 M Tris/HCI pH 8,8)
• 18,2 g Tris (Kat.-Nr. 37190) in Wasser (bidest.) lösen
• pH 8,8 einstellen (mit ca. 2,8 ml HCl, 32 %)
Sammelgel-Puffer, 4 x (0,5 M Tris/HCI pH 6,8)
• 6,1 g Tris (Kat.-Nr. 37190) in Wasser (bidest.) lösen
• pH 6,8 einstellen (mit ca. 4,4 ml HCl, 32 %)
Durchführung
- Acrylamid/Bis-Lösung, Puffer und Wasser getrennt für Sammel- und Tenngel in geeigneten Gefäßen, z. B. 30 ml-Saugflaschen ansetzen.
- Die Lösungen kurz entgasen (1-3 min im Vakuum).
- Zur Trenngel-Lösung 10 % SDS in Wasser zugeben, TEMED und Lösung von 10 % Ammoniumpersulfat (APS) durch leichtes Schwenken des Gefäßes untermischen, ohne Luft in die Lösung zu ziehen.
- Gießen des Trenngels: In das Slabgel-Sandwich soviel Gel-Lösung fällen, daß die Trennstrecke des Sammelgels das 1,5-fache der Taschentiefe des zu verwendenden Kamms betragen wird. Sofort mit Isopropanol (0,1 ml) überschichten, polymerisieren lassen (ca. 15 - 20 min).
- Zur Sammelgel-Lösung 10 % SDS in Wasser zugeben, TEMED und Lösung von 10 % Ammoniumpersulfat (APS) durch leichtes Schwenken des Gefäßes untermischen, ohne Luft in die Lösung zu ziehen.
- Gießen des Sammelgels: Slabgel-Sandwich bis zum Rand mit Sammelgel auffüllen, Kamm einstecken und polymerisieren lassen.