Protein-Quantifizierung
Die präzise Bestimmung der Proteinkonzentration ist ein wesentlicher Bestandteil im Proteinanalyse-Workflow. Es ist zwar eine große Anzahl verschiedener Proteinbestimmungs-Methoden etabliert, vor der Anwendung muss aber für jeden dieser Assays die Eignung für die spezifische Applikation geprüft werden. Jede Methode hat ihre spezifischen Vorteile und Einschränkungen und oft ist es notwendig, mehr als einen Proteinbestimmungs-Assay für eine Applikation durchzuführen.
Bradford-Reagenz
und der SingleQuant Assay Kit basieren auf der Bindung des Farbstoffs
an die Proteine und anschließender direkter Detektion des Farbumschlages
assoziiert mit dem gebundenen Farbstoff.
Bradford-Reagenz ist
aufgrund der hohen Sensitivität und einfachen Durchführung besonders geeignet
für die schnelle Abschätzung der Proteinkonzentration. Allerdings wird der
Assay durch in der Probe enthaltene Detergenzien gestört.
Der SingleQuant
Assay Kit zeichnet sich nicht nur durch einen weiten linearen Messbereich
aus, sondern auch die Anwesenheit von Detergenzien wie SDS oder CHAPS sowie
reduzierender Agenzien wie DTT interferiert nicht mit der Messung.
Die BCA
Protein Assay Macro/Micro Kits und der Lowry Kit basieren auf der
Reduktion von Kupfer durch Proteine gefolgt von einer Chelatreaktion, die
einen farbigen Komplex bildet.
Die BCA Protein Assay Macro/Micro Kits
haben den Vorteil, dass sie geringere Bindungsvarianzen zwischen verschiedenen
Proteinen zeigen als der Bradford-Assay und kompatibel mit den meisten
Detergenzien sind.
Trotz der Entwicklung neuerer Proteinbestimmungkits
bleibt der Lowry Kit eine sensitive, akkurate und zweckmäßige Methode
für viele Applikationen. Besonders geeignet ist der Kit für die Bestimmung der
Proteinkonzentration nach der TCA-Fällung, da durch die Fällung den Assay
störende Substanzen entfernt werden.
Eine deutlich höhere
Sensitivtät und Genauigkeit der Proteinkonzentrationsbestimmung wird mit Kits
erreicht, die auf der Bindung eines Fluoreszenzfarbstoffes an Proteine und der
anschließenden Detektion der emittierten Fluoreszenz beruhen.
Der SERVA
Purple Protein Quantifizierungs-Assay basiert auf dem umweltfreundlichen
Fluoreszenzfarbstoff SERVA Purple. Der Assay hat nicht nur eine sehr hohe
Sensitivität, es werden auch hydrophobe, Glyko-, Phospho-Proteine und Peptide
präzise angefärbt.