Zymolyase^®, hergestellt in einer submersen Arthrobacter luteus-Kultur (1), besitzt starke lytische Aktivität für die Zellwände lebender Zellen einer Vielfalt von Hefestämmen. Sie wird daher häufig eingesetzt, um Protoplasten oder Sphäroplasten herzustellen (2, 3). Dieses Enzym wird durch Ammoniumsulfat-Fällung gewonnen. Die essentielle Enzymaktivität ist die β-1,3-Glucanlaminaripentaohydrolase. Diese hydrolysiert lineare Glukosepolymere mit β-1,3-Bindungen und setzt als Hauptprodukt spezifisch die Laminaripentaose frei (4, 5). Die lytische Aktivität variiert in Abhängigkeit vom jeweiligen Hefestamm, dem Wachstumsstadium der Hefe und den genauen Kulturbedingungen (6, 7, 8).
Weitere enthaltene Hauptnebenaktivitäten sind β-1,3-Glucanase, Protease, Mannanase.
Bei 30 °C gehen ca. 70 % der lytischen Aktivität innerhalb von 3 Monaten und bei 60 °C nach 5 Minuten vollständig verloren.
Für die Lyse lebender Hefezellen ist das Temperaturoptimum 35 °C bei pH 7,5 und für die Hydrolyse von Glucan 45 °C bei pH 6,5.
Die lytische Aktivität von Zymolyase^® wurde für Ashbya, Candida, Debaryomyces, Eremothecium, Endomyces, Hansenula, Hanseniaspora, Kloeckera, Kluyveromyces, Lipomyces, Metschnikowia, Pichia, Pullularia, Torulopsis, Saccharomyces, Saccharomycopsis, Saccharomycodes, Schwanniomyces, etc. gezeigt (5). SH-Verbindungen wie Cystein, 2-Mercaptoethanol oder Dithiothreitol wirken als Aktivator.

Hinweise zur Anwendung:
Da die Zymolyase^® in Puffern nicht komplett löslich ist, wird das Enzym als Suspension verwendet. Eine 2 oder 10 %ige Stocklösung kann in 10 mM Natriumphosphatpuffer (pH 7,4) oder 50 mM Tris‑Cl (pH 7,5), jeweils mit 5 % Glukose und 50 % Glyzerin, angesetzt werden. Die Suspension kann in Aliquots bei ‑20 °C aufbewahrt werden. Die Arbeitskonzentration ist 2 ‑ 5 mg/ml und die Suspension kann optional sterilfiltriert werden (0,2 µm, keine Nitrozellulosefilter). Die Zymolyase^® kann auch in frischem Arbeitspuffer (z. B. 50 mM Tris-Cl, pH 7,5, 10 mM EDTA, 0,3 % 2‑Mercaptoethanol) in der Endkonzentration direkt vor Verwendung angesetzt werden.

Einheitendefinition: Eine Einheit lytische Aktivität entspricht der Enzymmenge, die bei 25 °C eine Abnahme der Absorption bei 800 nm um 30 % bewirkt, unter Verwendung von 6 mg Brauereihefe als Substrat in Phosphatpuffer (pH 7,5).
Zymolyase = eingetragenes Warenzeichen der Kirin Holdings Company Limited


References:

1. Kaneko, T. et al. (1969) J. Gen. Appl. Microbiol. 15, 317 ff.
2. Kitamura, K. et al. (1971) Arch. Biochem. Biophys. 145, 402 ff.
3. Kitamura, K. et al. (1972) J. Gen. Appl. Microbiol. 18, 57 ff.
4. Kitamura, K. & Yamamoto, Y. (1972) Arch. Biochem. Biophys. 153, 403 ff.
5. Kaneko, T. et al. (1973) Agric. Biol. Chem. (1973) 37, 2295 ff.
6. Kitamura, K. et al. (1974) J. Gen. Appl. Microbiol. 20, 323 ff.
7. Kitamura, K. & Yamamoto, Y. (1981) Agric. Biol. Chem. 45, 1761 ff.
8. Kitamura, K. & Tanabe, K. (1982) Agric. Biol. Chem. 46, 553 ff.

GEFAHR

Gefahrenhinweise	H334
Vorsichtsmaßnahmen	P261 - P284
Reaktion	P304 +P340 - P342 +P311

HS: 35079090
Lagertemperatur: +2 °C to +8 °C