Tankblotting
Tank Blotting
| Transferpuffer (10x Stocklösung): |
0,25 M Tris 1,92 M Glycin |
| Arbeitslösung: | 100 ml der 10x Stocklösung mit 200 ml Methanol und 700 ml dest. Wasser verdünnen. |
- Schneiden Sie die Transfermembran und vier Blatt Whatmann 3 MM Papier auf Gelgröße (7 x 8 cm).
- Äquilibrieren Sie die Membran in Transferpuffer (Towbin-Puffer, Kat.-Nr. 42558). Bei der Verwendung von PVDF-Membranen zunächst für 2 Minuten in Methanol und anschließend für weitere 5 Minuten in Transferpuffer äquilibrieren.
- Befeuchten Sie die porösen Pads sowie die vier Blatt Whatmann 3 MM Papier ebenfalls mit Transferpuffer.
- Entnehmen Sie das Gel der Kassette und äquilibrieren Sie das Gel für 5 Minuten in Transferpuffer.
- Bauen Sie das Transfersandwich nach den Herstellerangaben auf und setzen Sie es in den Tankblotter.
- Der Transfer erfolgt bei Raumtemperatur bei 250 mA bzw. ca. 60 V für ca. 1 -2 Stunden (für Standardmarkerproteine).
Nach dem Transfer können die Proteine auf der Membran angefärbt werden:
• Nachweis mit Ponceau S-Lösung (0,2 %, Kat.-Nr. 33427)
• Färben mit Amidoschwarz