Semi-dry Proteintransfer
Semi-Dry Protein-Transfer
- Schneiden Sie die Transfermembran und vier Blatt Whatmann 3 MM Papier auf Gelgröße (7 x 8 cm).
- Äquilibrieren Sie die Membran in Transferpuffer (Towbin-Puffer, Kat.-Nr. 42558) bzw. bei der Verwendung von PVDF-Membranen zunächst für 2 Minuten in Ethanol und anschließend für weitere 5 Minuten in Transferpuffer.
- Befeuchten Sie die vier Blatt Whatmann 3 MM Papier ebenfalls mit Transferpuffer.
- Entnehmen Sie das Gel der Kassette und äquilibrieren Sie das Gel für 5 Minuten in Transferpuffer.
- Bauen Sie das Transfersandwich analog entsprechend den Herstellerangaben zum Blotter auf, und platzieren Sie es im Semi-Dry-Blotter.
- Der Transfer erfolgt bei Raumtemperatur mit 1,5 mA/cm2 Gelfläche für ca. 1 Stunde (für Standardmarkerproteine).
Beim Transfer von unterschiedlich großen Proteinen empfiehlt sich der Einsatz eines diskontinuierlichen Blotting-Puffersystems (SERVA Semi-Dry Blotting Kit, Kat.-Nr. 42559.01).