Herstellung des Towbin-Puffers

Herstellung von Towbin-Puffer

 

Puffer 10x Komponente Konzentration
Tris
Glycin
pH 8,6 ± 0,2
0,25 M
1,92 M 

 

 

Arbeitslösung:

  • Für eine effiziente Bindung an die Membran wird dem Puffer meist Methanol zugesetzt. Für Nitrocellulose wird ≤20 % (w/v) und für PVDF ≤15 % verwendet.

  • Für positiv geladene Nylonmembranen sollte der Puffer ohne Methanolzusatz eingesetzt werden.

  • Methanol kann allerdings die Löslichkeit von Proteinen herabsetzen und ein Schrumpfen des Gels bewirken, was die Elutionsrate verringert. Abhängig von der Probe sollte dann weniger oder gar kein Methanol zugegeben werden. Für native Proteine empfiehlt es sich, den Puffer ohne Methanol zu verwenden.

  • Die Zugabe von 0,1 % SDS (w/v) kann die Elutionsrate der Proteine aus dem SDS-Gel verbessern. Allerdings hemmt SDS im Puffer die Bindung der Proteine an die Membran, weshalb auch die Zugabe von SDS für jede Probe individuell bestimmt werden muss.

Ansatz für 1 L 1x Laufpuffer : 

Zu 100 ml 10x Konzentrat werden 200 ml Methanol und 700 ml deionisiertes Wasser gegeben.

Konzentration der Komponenten in der 1x Lösung:
-  0,025 M Tris 
-  0,192 M Glycin
-  20 % Methanol

 

Towbin et al., (1979), PNAS USA 76, 4350 – 4354
Gershoni and Palade, (1982), Anal. Biochem. 131, 1 – 15


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